价格：4400

      规格：套（100ml+10ml）

      货号：05-220-1B+05-221-1D

      产品名称：间充质干细胞成软骨诱导分化基础培养基  100ml

                   MSCgo™ Chondrogenic Differentiation Basal Medium +

                   间充质干细胞成软骨诱导分化营养添加物  10ml

                   MSCgo™ Chondrogenic Differentiation Supplement Mix 

产品详情：

MSCgo™ Chondrogenic Differentiation Medium间质干细胞成软骨诱导分化培养基，无血清，无异源成分，即用型，

适用于不同来源的hMSC，如骨髓、脂肪组织和脐带组织（hMSC-BM，hMSC-AT，hMSC-CT）。

成软骨结果

hMSC成软骨分化，细胞会聚集形成3D球状，同时伴随细胞外基质有蛋白聚糖 (Aggrecan) 富集的情形。

所以可用Alcian Blue（深蓝色的含铜染料）染色检验蛋白聚糖，作为成熟软骨形成的指标。

不过染色的强度会因不同hMSC来源（类型、年龄、代数）而有差异。

试剂盒组成

MSCgo™间质干细胞成软骨诱导分化培养基

完全培养基配制

1      室温下解冻Supplement Mix。

2      以1：10将Supplement Mix稀释进Chondrogenic Basal Medium（如：10ml Supplement Mix+90ml Basal Medium）。

3      完全培养基可在2-8°C储存一个月。

成软骨实验所需材料

维持培养基

MSC NutriStem® XF Medium: BI；05-200-1，05-201-1

分化培养基

MSCgo™ Chondrogenic Differentiation Medium：05-220-1B, 05-221-1D

96-well U-bottom, non-tissue culture treated plate (for suspension)

染色试剂

建议选择Vivacell品牌，间充质干细胞成软骨分化染色试剂盒，货号：C37B0-0150。

成软骨诱导分化操作

以维持培养基接种hMSC

1.    细胞以1x105/（10µl培养基）接种进1孔U底的96孔盘（非TC-treated）置于37°C，5% CO2细胞培养箱

2小时后 (促进细胞聚集成团)，小心加入0.1ml培养基。

ž 小微团的培养方式有助于球状细胞团形成

2.  置于37°C，5% CO2细胞培养箱，继续培养。

以成软骨分化培养基诱导分化

1.    培养24小时后，将维持培养基吸除，每孔（96孔盘）加入0.2ml分化培养基

ž 球状细胞团会在24-48小时形成

2.      置于37°C，5% CO2细胞培养箱中培养14-21天；期间每3-4天更换一次分化培养基。

注意：培养时间长，可以得到更多成熟的软骨细胞（Alcian Blue染色强度更大）。

【检验方法】

  以操作一个T25 flask为例：

1.   吸弃分化培养基，加入1 ml DPBS (BI 02-023-1ACS) 轻轻润洗培养瓶底面。

2.   吸弃DPBS，加入3 ml Fixation solution (C37B10020)，轻轻晃动培养瓶，使底面浸润均匀。室温下静置30 分钟。

3.   吸弃Fixation solution ；加入3 ml Wash I (C37B20050)，润洗细胞，静置2-3分钟。

4.   吸弃Wash I，加入3 ml Staining Solution (C37B30020)，底面浸润均匀，室温避光染色过夜。

5.   吸弃Staining Solution，加入3 ml Wash II (C37B40050)，润洗细胞。

6.   吸弃Wash II，重复第5步，再次漂洗细胞（如若上清依然很蓝，可延长漂洗时间或再漂洗一次。注意：不要把细胞冲下来）。

7.   吸弃Wash II，加入1 ml Inspection Solution (C37B50010)，置于显微镜下观察、拍照。

说明书下载：

6380671782135223901068899.pdf